小鼠胚胎成纖維細胞MEF

　　小鼠胚胎成纖維細胞MEF種屬鑒定安為生物

　　小鼠胚胎成纖維細胞MEF

　　MEF【MEF】

　　l細胞鑒定

　　種屬鑒定已通過

　　l細胞來源

　　國家資源庫

　　l細胞背景

　　取孕9天的615小鼠胚胎，去除腦、心臟等培養建立。該細胞可用作飼養層細胞，支持胚胎干細胞ES的生長并維持ES未分化的狀態。當作為飼養層細胞時，MEF需經絲裂mei素C處理停止生長。建議作為ES細胞的飼養層時，MEF不要超過6代。

　　l細胞特性

　　1）來源：小鼠胚胎

　　2）形態：成纖維細胞樣，貼壁生長

　　3）含量：>1x106細胞數

　　4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5)用途：僅供科研使用

　　l培養條件

　　1）準備D/F12（推薦awcell-0005）培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

　　2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

　　l注意事項

　　對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10?S的培養基來終止消化。

　　3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

　　l運輸形式

　　低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

　　常溫:（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

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